高效液相色谱仪器使用方法

转载：《分析测试百科网》高效液相色谱仪（Agilent1100型）操作规程

不知道楼主要什么型号的液相色谱使用方法？

一、开机

1、开机前准备：流动相使用前必须过0.45um的滤膜（有机相的流动相必须为色谱纯；水相必须用新鲜注射用水，不能使用超过3天的注射用水，以防止长菌或长藻类）；把流动相放入溶剂瓶中。

A瓶：为水相B瓶：为有机相。

2、打开电脑，选Win2000，进入Win2000界面。

3、双击CAGBoodpserver图标，放大CAGBoodpserver小图标，出现窗口，5min内打开液相各部件电源开关，等待1100广播信息后，表示通讯成功连接，关闭CAGBoodpserve窗口。

4、双击online图标，仪器自检，进入工作站。

该页面主要由以下几部分组成：

——最上方为命令栏，依次为File，RunControl，Instrumen…等；

——命令栏下方为快捷操作图标，如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件保存文件……等；

——中部为工作站各部件的工作流程示意图；依次为进样器-输液泵-柱温箱-检测器-数据处理-报告；

——中下部为动态监测信号；

——右下部为色谱工作参数：进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。

4、从“View”菜单中选择“Methodandcontrol”画面。

二、编辑参数及方法

1、开始编辑完整方法：

从“Method”菜单中选择“Newmethod”，出现DEF-LC.M，从“Method”菜单中选择“Editentiremethod”，选择方法信息、仪器参数及收集参数、数据分析参数和运行时间表等各项，单击OK，进入下一画面。

2、方法信息：

在“MethodComments”中加入方法的信息，如方法的用途等。

单击OK，进入下一画面。

3、泵参数设定：

进入“Setuppump”画面，在“Flow”处输入流量，如1ml/min；在“SolventB”处输入有机相的比例如70.0，（A=100-B），也可在Insert一行“Timetable”，编辑梯度；输入保留时间；在“PressureLimitsMax”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。

单击OK，进入下一画面。

4、DAD检测器参数设定：

进入“DADsignals”画面，输入样品波长及其带宽、参比波长及其带宽（参比波长带宽默认值为100nm）；选择Stoptime：asPupm；

在“Spectrum”中输入采集光谱方式“store”：选All；如只进行正常检测，则可选None；范围Range：可选范围为190~950nm；步长Step可选2.0nm；

阀值：选择需要的灯；

Peakwidth（Responsetime）即响应值应尽可能接近要测的窄峰峰宽，可选“2s”或4s；

Slit-：狭窄缝，光谱分辨率高；宽时，噪音低。

可选4nm

单击OK，进入下一画面。

5、进入“SignalDetails”画面，单击OK，进入下一画面。

6、进入“EditIntegrationEvents”（编辑积分结果）画面，单击OK，进入下一画面。

7、进入“Specifyreport”（积分参数）画面，单击OK，进入下一画面。

8、进入“Instrumentcurves”画面，单击OK，进入下一画面。

9、进入“RunTimechecklist”（运行时间表）画面，选择“DateAcquistition”和“StandardDateAnalsis”，单击OK，完成参数设定，回到工作站画面。

10、单击“Method”菜单，选中“Savemethodas”，输入文件名，单击OK。

（路径：e\HPCHEM\1\methods\***）

注：如果调用一个方法，则在“Method”菜单，选中“Loadmethod”，选方法名，单击OK。

11、从菜单“View”中选择“Onlinesignal”，选中Window1，然后单击Change钮，将所要绘图的信号移到右边的框中，点OK。

（如同时检测二个信号，则重复11，选中Window2）。

三、运行样品

1、单击泵（Pump）图标下面的小瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，并且选停泵体积。

单击OK。

2、手动打开Purge阀：逆时针转2~3圈。

3、单击泵（Pump）图标，出现参数设定菜单，单击Setuppump选项，进入泵编辑画面。

设Flow：5ml/min，单击OK。

4、开泵：直接点Pump图标下面的泵开关小图标，或单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pumpcontrlo选项，选中On，单击OK。

5、系统开始排液（Purge），直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，切换通道继续排液，直到所有通道无气泡为止。

（每个管线内液体约20ml，在5ml/min的流速下，均需4~5min才能排完）

6、单击泵（Pump）图标，出现参数设定菜单，单击Setuppump选项，进入泵编辑画面。

把Flow改为0.5~1.0ml/min，单击OK。

7、等待流速降下来后，关闭排液阀。

8、待压力稳定后，从“Instrument”菜单中选择“Systemon”或单击GUI图标的On图标启动系统。

开始走基线，并可选择观察信号。

注：仪器运行过程，画面颜色由灰色转变成黄色或绿色，当各部件都达到所设参数时，画面均变为绿色，左上角红色的“notready”变为绿色“ready”，表明可以进行分析。

（此时如果要终止仪器的运行，可单击流程图右下角的“off”，再单击“Yes”，关闭输液泵和检测器氘灯）。

9、单击最大化按钮，将onlinePlot窗口放大。

待基线平稳后，点信号窗口的“Banlance”，调至零点。

10、等仪器Ready，从“Runcontrol”菜单中选择F5或“Runmethod”。

11、编辑样品信息：

从“Runcontrol”菜单中选择“Sampleinto”选项，选择“SampleInfo…..”，即打开了样品信息页面，输入操作者（OperatorName）、数据存贮通道（Subdirectory）、样品名（SampleName）、进样瓶号（Vial）、浓缩因子（Multipline）、稀释因子（Dilution）、，“Datafile”中选择“Prefix”，在Prefix框中输入批号或日期等，在Counter框中输入计算器的起始位，仪器会自动命名。

（样品量（SampleAmount）、内标量（ISIDAmount）可不选，Location只对自动进样器有用，不填则走空白，检查干扰峰的来源。

）

单击OK。

12、进样分析：

进样阀扳到Load位置，插入注射器，注样品，进样后扳动阀至Inject位置。

13、进样分析结束，点Close键退出样品分析。

（注意：检测完尽量要关DAD的灯，以保持灯的寿命。

单击DAD图标，出现参数设定菜单，单击control，选择关灯。

）

四、数据分析方法编辑（可在offline下操作）

1、从“View”菜单中选“Dateanalysis”进入数据分析画面。

该页面最上方为命令栏，依次为File，Graphics，Integration……等。

命令栏下为快捷操作图标，如积分、校正、色谱图、单一色谱图调用、多色谱图调用、调用方法、保存等。

2、从“File”菜单中选“Loadsignal”，或单击快捷操作的“单一色谱图调用”图标，选择色谱图文件名，单击“OK”，画面中即出现所调用的色谱图。

3、做图谱优化，从“Graphics”菜单中选择“Signaloptions”选项。

从Ranges中选择Auaoscale及合适的显示时间，单击OK，或选择“UseRanges”调整。

反复进行，直到图的比例合适为止。

4、积分

（1）先调用所要分析的色谱图，从“Integration”中选择“Autointegrate”，从“Integration”中选择“IntegrationResults”，此时仪器将内置的积分参数给出积分结果。

如积分结果不理想，再从“Integration”菜单中选择“IntegrationEvents”选项，或单击快捷操作的“编辑/设定积分表”图标，此时，在屏幕下方左侧出现积分参数表，右侧为积分结果，在积分参数表中按实际的要求输入修改的参数，如斜率（Slopesensitivity）、峰宽（Peakwidth）、最小峰面积（Areareject）、最低峰高（Heightreject）等。

（2）从“Integration”中选择“Integrate”选项或单击快捷操作的“对现有色谱图积分”图标，仪器即按照新设定的积分参数重新积分。

（3）若积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。

（4）完成后，单击左边的“ˇ”图标，将积分参数存入方法。

5、打印报告：

（1）从“Report”菜单中选择“Specifyreport”选项，或单击最右侧快捷操作的“定义报告及打印格式”（右下角带叉的报告画面）图标，进入打印画面。

（2）根据实际要求选择报告的格式和输出形式等。

可在“Calculate”右则的黑三角中选“Percent”（面积百分比），其它项不变。

（如“Destination”项下选择“Screen”；“basedOn”选“Area”；“SortedBy”选“Signal”；“RepirtStyle”选“Short”；选择“AddchromatogramOutput（打印色谱图）”；选择“WithCalibratedPeaks”；选择“Portrait”；可根据需要选择“Size”）。

（3）单击OK。

（4）选择快捷操作的“报告预览”图标，可预览报告的全貌。

从“Report”菜单中，选择“PrintReport”，则报告打印到屏幕上，如想输出到打字机上，则单击“Print”，即可进行报告的打印。

最后，单击“close”退出此操作页面。

6、定量分析

如果需要进行标准曲线制备，可按此项进行操作。

（1）一级校正表的建立：

在“DataAnalysis”界面下，调用最低浓度的色谱图，在“栏“Calibration”下，选择“NewCalibrationTable”，选择“AutomaticSetupLevel”，并设校正级数为“1”，单击“OK”。

在画下方左侧出现校正表，右侧为校正图。

在画面左下侧的校正表中选择所要的色谱峰，输入校正级数、化学物名称及浓度，如果采用内标法，需对内标峰进行标记。

单击OK，工作站提示是否删除0浓度行，单击Yes。

（2）二级校正表的建立：